ПЦР: полимеразная цепная реакция, в которой ДНК раскручивается (денатурируется) in vitro при 95 ° C.При 55 ° C праймеры и отдельные цепи объединяются (отжиг) в соответствии с принципом комплементарного спаривания оснований, а затем температура регулируется. Примерно до 72 ° C ДНК-полимераза синтезирует дополнительные цепи (простирается) в направлении от фосфорной кислоты до пятиуглеродных сахаров (5'-3 ').
Инструмент ПЦР на самом деле является устройством контроля температуры, которое может хорошо контролировать температуру между 95 ° C, 55 ° C и 72 ° C.
В соответствии с назначением стандартов амплификации и обнаружения ДНК, инструменты для ПЦР можно разделить на: обычные инструменты для ПЦР, инструменты для градиентной ПЦР, in-situ ПЦР, флуоресцентные количественные ПЦР-инструменты в реальном времени и т. Д.
①Обычная ПЦР-машина
Как правило, ПЦР-машина, которая может работать только при определенной температуре отжига для ПЦР-амплификации, называется обычной ПЦР-машиной, которая также является традиционной ПЦР-машиной. Если вы хотите использовать его для разных температур отжига, вам нужно запустить его несколько раз.
Обычные ПЦР-машины в основном используются в научных исследованиях, обучении, клинической медицине, инспекции, карантине и т. Д.
②Прибор градиентной ПЦР
Однократная амплификация ПЦР позволяет установить ряд различных температурных условий отжига (обычно 12 температурных градиентов), называемых прибором градиентной ПЦР. Различные фрагменты ДНК имеют разные оптимальные температуры отжига.Устанавливая серию градиентных температур отжига для амплификации, однократная ПЦР-амплификация может отсеивать наиболее подходящую температуру отжига с высоким уровнем экспрессии для эффективной амплификации.
Инструмент градиентной ПЦР в основном используется для исследования амплификации неизвестной температуры отжига ДНК, что экономит время и деньги. Его также можно использовать как обычную ПЦР без установки градиента. Инструмент градиентной ПЦР в основном используется в научных исследованиях, учебных заведениях, инспекциях, карантине и т. Д.
③ Аппарат для ПЦР на месте
ПЦР предназначена для извлечения ДНК из клеток или тканей для реакции амплификации гена, в то время как ПЦР in situ предназначена для поддержания целостности клеток или тканей, обеспечения проникновения реакционной системы ПЦР в ткани и клетки и выполнения генов на участке ДНК-мишени клетки. Усиление. Может быть обнаружена не только целевая ДНК, но и тип клетки, в которой находится целевая ДНК, что более способствует изучению взаимосвязи между целевой ДНК и клеткой.
Инструмент ПЦР in-situ в основном используется для: (1) обнаружения фрагментов экзогенных генов, увеличения скорости обнаружения, сосредоточения внимания на проверке вирусных инфекций, таких как ВИЧ, ВПЧ, ВГВ, ЦМВ и т. Д .; (2) Наблюдение за вирусными инфекциями. Распределение патогенов в организме Закон (3) Фрагменты эндогенных генов, такие как моногенные заболевания человека, рекомбинантные гены, транслоцированные хромосомы, фрагменты мРНК Ig, фрагменты онкогенов и т. д. (4) Обнаружение введенных генов; (5) Обнаружение генетических заболеваний, таких как β-талассемия.
④Инструмент флуоресцентной количественной ПЦР в реальном времени
Система сбора флуоресцентного сигнала и компьютерная система анализа и обработки добавлены на основе конструкции обычного прибора для ПЦР, чтобы сформировать прибор для ПЦР с функцией количественного определения флуоресценции. Принцип ПЦР-амплификации такой же, как и у обычной ПЦР-амплификации. Праймеры, добавленные во время ПЦР-амплификации, помечаются изотопами, флуоресцеином и т. Д., А праймеры и флуоресцентные зонды используются для одновременного специфического связывания с матрицей для усиление. Усиленный результат подключается к компьютерной системе анализа и обработки через сигнал регистрации в реальном времени системы регистрации сигнала флуоресценции, и получается количественный результат в реальном времени.
Аппараты количественной ПЦР флуоресценции делятся на одноканальные, двухканальные и многоканальные. Когда для мечения используется только один флуоресцентный зонд, используйте один канал; когда имеется несколько флуоресцентных меток, используйте несколько каналов. Один канал может также обнаруживать мультифлуоресцентные маркеры и продукты экспрессии целевого гена, потому что только одна величина амплификации целевого гена может быть обнаружена за один раз, а для обнаружения количества различных фрагментов целевого гена требуется несколько амплификаций. Многоканальность способствует мультиплексной ПЦР и реализует функцию одновременного обнаружения нескольких целевых генов.
Инструмент количественной ПЦР флуоресценции в основном используется в клинических медицинских испытаниях, исследованиях и разработках биомедицины, пищевой промышленности, научно-исследовательских учреждениях и т. Д. Технология количественного определения флуоресценции имеет множество аспектов клинической диагностики, в основном сосредоточиваясь на клинической диагностике заболеваний, вызванных различными патогенами, таких как гепатит, венерические заболевания, заболевания, связанные с дородовым и послеродовым уходом, а также туберкулез.